• <button id="gtfjh"><object id="gtfjh"><cite id="gtfjh"></cite></object></button>

    產品分類

    您的位置:首頁 > 技術文章 > 您了解結合物嗎?

    技術文章

    您了解結合物嗎?

    時間:2023-05-09 瀏覽次數:30


    結合物即酶標記的抗體(或抗原),是ELISA中至關重要的關鍵的試劑。良好的結合物應該是既保有酶的催化活性,也保持了抗體(或抗原)的免疫活性。結合物中酶與抗體(或抗原)之間有恰當的分子比例,在結合試劑中應盡量不含有或少含有游離的(未結合的)酶或游離的抗體(或抗原),此外,結合物尚要有良好的穩定性。

                                                           

    用于ELISA的酶應符合以下要求:

    ①純度高

    ②催化反應的轉化率高

    ③專一性強

    ④性質穩定

    ⑤來源豐富

    ⑥價格不貴

    ⑦制備成酶結合物后仍繼續保存它的活性部分和催化能力

    ⑧在受檢標本中不存在相同的酶

    ⑨相應底物易于制備和保存,價格低廉,有色產物易于測定等

     

    在ELISA中,常用的酶為辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶。在少數商品ELISA試劑中,應用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。國產ELISA試劑一般都用HRP制備結合物。HRP是一種糖蛋白,含糖量約為18%,分子量為44000,是一種復合酶,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結合而成,是一種卟啉蛋白質。主酶無色糖蛋白在275nm波優點有高吸收峰,輔基是深棕色的含鐵卟啉環,在403nm波優點有高吸收峰。HRP的純度用RZ(Reinheit Zahl,德文,意為純度數)表示,是403nm的吸光度與280nm吸光度之比,高純度的HRP的RZ≥7.0。

     

    HRP除符合上述的ELISA中標記酶的要求外,更有價格低廉和性質較穩定的特點。值得留意的是,在選用酶制劑時,除其純度RZ外,更應留意酶的活力。高純度的酶如保存不當,活力也會降低。酶制劑的活力以所含的酶活力單位表示,可用對底物作用后天生產物量的測定進行試驗。

     

    國外很多ELISA試劑采用堿性磷酸酶(AP)作為標記酶。常用的AP有兩個來源,分別從大腸桿菌和小牛腸膜中提取。不同來源的酶生化特性特性略不相同,從大腸桿菌中提取的AP分子量為80000,酶作用的適合pH為8.0;用小牛腸膜中提取的AP分子量為100000,適宜pH為9.6。在ELISA中,AP系統的敏感度一般高于HRP系統,空缺值也較低,但AP價格昂貴,制備結合物所得率也較HRP低。

     

    制備結合物時所用抗體一般 均為純度較高的IgG,以免在與酶聯結時其他雜蛋白的干擾。用親和層析純的抗體,這樣全部酶結合物均具有特異的免疫活性,可以在高稀釋度進行反應,實驗結果本底淺淡。如用F(ab)2進行標記,則更可避免標本中RF的干擾。在ELISA中用酶標抗原的模式未幾,總的要求是抗原必須是高純度的。

     

    用于稀釋高濃度的結合物以配成工作液。為避免結合物在反應中直接吸附在固相載體上,在稀釋緩沖液中常加進高濃度的無關蛋白質(例如1%牛血清白蛋白),通過競爭以抑制結合物的吸附。一般還加進具有抑制蛋白質吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑,如吐溫20,0.05%的濃度較為適宜。在間接測定抗體時,血清標本需稀釋后進行測定,也可應用這種稀釋液。

     

     


    上海勁馬生物科技有限公司(www.enduranceyachts.com)主營:ELISA檢測試劑盒;免疫組化試劑盒,胎牛血清;酶聯免疫試劑盒,進口抗體,生物試劑

    郵箱:2885306215@qq.com

    地址:上海市松江區漕河涇研展路455號B座

    版權所有 © 2023 上海勁馬生物科技有限公司   備案號:滬ICP備15015681號  管理登陸  技術支持:環保在線  sitemap.xml

    在線客服 在線咨詢 聯系方式 二維碼

    服務熱線

    13817140470

    掃一掃,添加微信

    国产精品色无码AV性色aV_亚洲色欲久久久综合网东京热_久久国产精品免费一区二区三区睡前观看_比较有韵味的熟妇无码
  • <button id="gtfjh"><object id="gtfjh"><cite id="gtfjh"></cite></object></button>

    掃一掃訪問手機站掃一掃訪問手機站
    訪問手機站