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    產品名稱:

    小鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA試劑盒

    產品型號:
    更新時間: 2020-12-29
    描述:小鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA試劑盒【樣品稀釋的一般原則】用戶須查閱文獻了解標本內待測因子的含量,決定適當的稀釋倍數,以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的Z佳檢測范圍。樣品的稀釋應有詳細記錄。

    產品介紹

    小鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA試劑盒使用前*閱讀說明書。本酶聯免疫試劑盒是基于經典酶聯夾心技術原理,只能用于研究用途,不得用于醫學診斷。

    【工作原理】
    。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經生物素(biotin)標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應;經過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。
    【每套試劑盒中內容】(96T)

    材料 數量
    標準品 96T(2vial)
    預包被抗體的96孔板 96T(8×12)
    生物素標記人ANG抗體 96T (1:100)
    ABC(親和素-過氧化物酶復合物) 96T (1:100)
    樣品稀釋液 96T×2
    抗體稀釋液 96T×1
    ABC稀釋液 96T×1
    TMB顯色液A 96T×1
    TMB顯色液B 96T×1
    TMB終止液 96T×1
    ELISA洗滌液 96T×1(1:25)

    【需要而未提供的試劑和器材】
    1. 37℃恒溫箱。
    2. 標準規格酶標儀。
    3. 自動洗板機。
    4. 單通道或多通道可調節移液器以及其吸頭。
    5. 蒸餾水,容量瓶等
    6. 干凈的試管和Eppendof管。

    小鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA試劑盒注意事項】
    1. 從-20℃取出的試劑盒,在4℃解凍過夜。盒內每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻,避免解凍時出現的分層,否則會出現濃度不均一的現象。
    2. 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
    3. 配制各種試劑時,切記混勻!
    4. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。
    5. 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
    6. 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活!
    7. 為免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和試管。

    【洗板方法】
    手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。
    自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

    【樣品的準備和保存】
    樣品如果不立即分析,應分裝后冷凍保存,且避免反復凍融。
    血清——用干凈試管收集血液,室溫凝固2小時或4℃過夜,離心1000×g 10分鐘,收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
    細胞培養、組織勻漿、體液——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

    【樣品稀釋的一般原則】
    用戶須查閱文獻了解標本內待測因子的含量,決定適當的稀釋倍數,以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*檢測范圍。樣品的稀釋應有詳細記錄。

    小鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA試劑盒試劑的準備和保存】
    A. 標準品的稀釋和使用:在使用前2小時內準備。將凍干品管內加入1ml樣品稀釋液,*溶解后做倍比稀釋。
    8稀釋后的標準品在2小時內使用。

    B.生物素標記抗體工作液:在使用前2小時內準備。
    1. 根據每孔需要0.1ml計算總的用量(實際配制時應多配制0.1-0.2ml)。
    2. 按10ul生物素標記抗體稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

    C.親和素-過氧化物酶復合物(ABC)工作液的準備:在使用前1小時內準備。
    1. 根據每孔需要0.1ml計算總的用量(實配時應多配制0.1-0.2ml)。
    2. 按10ul親和素-過氧化物酶復合物(ABC)加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

    D. TMB顯色工作液的準備:在使用之前30分鐘,按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液。

    小鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA試劑盒操作程序】
    1. 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目。
    2. 將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。
    3. 酶標板加上蓋,37℃反應90分鐘。
    4. 反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體;或甩去酶標板內液體,再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
    5. 將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應60分鐘。
    6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。
    7. 將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應30分鐘。
    8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。
    9. 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,37℃避光反應,反應過程中,要經常的觀察,當肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔差別不明顯時,即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應zui長不要超過30分鐘)。
    10. 用酶標儀在450nm測定O.D.值。
    11. 根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了N倍,其實際濃度應該×N。

    【操作程序總結】:
    準備試劑,樣品和標準品

    加入準備好的樣品和標準品,37℃反應90分鐘

    洗板2次,加入生物素化人ANG抗體工作液,37℃反應60分鐘

    洗板3次,加入ABC工作液,37℃反應30分鐘

    洗板5次,加入TMB顯色液,37℃反應

    加入TMB終止液

    30分鐘之內讀OD值

    計算標本待測因子含量

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